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蛋白纯化过程中常常会使用到各种方法，通过特异性吸附或者渗透压等方式提升蛋白纯度，镍柱纯化就是其中最常用的方式之一。下面，普健生物和大家具体聊聊有关镍柱纯化的相关原理和具体步骤。 蛋白镍柱纯化的原理： 通过使用镍柱和His标签之间的亲和力来实现蛋白纯化的过程。当蛋白经过镍离子滤膜时，他们会和镍离子结合，形成镍-蛋白复合物，这样，就能将蛋白从溶液中分离出来。而后，再通过洗脱液将镍离子和蛋白分开，从而获得所需蛋白; 镍离子蛋白纯化的具体步骤： 1、通过将氯化镍倒入柱子中，平衡好柱子，以提供蛋白最适宜的环境; 2、平衡4个柱子后放入蛋白中，可以让蛋白自动挂上镍柱上，这样效果也会更好。需要控制好流速，且可以循环挂柱; 3、挂完后，需要加入咪唑来洗脱。一般来说，咪唑会抢夺Ni的结合点，会将蛋白洗脱下来; 4、而后可以多洗脱几次，这样就能获得纯度更高的蛋白; 总的来说，采用镍柱纯化蛋白能够在一定程度上提升蛋白的纯度，但是也只能在一定程度上提升纯度。不过随着技术的不断发展，相信未来蛋白的纯度会越来越高，相关成本也会越来越低。武汉普健生物专业为广大用户提供蛋白纯化服务，如果您有相关需求，欢迎前来咨询。 (责任编辑：) |